中文简体
Upravo ste pokrenuli metodu gradijenta koja je prošli tjedan savršeno funkcionirala. Kalibracijski standardi izgledaju čisti, ali kromatogram uzorka pokazuje dodatni vrh na 23,8 minuta. Zamijenite kolonu, pripremite novi pufer i provjerite detektor. Vrh je još uvijek tu. Zatim zamijenite vodu koja prelazi u mobilnu fazu i artefakt nestaje. To je stvarnost tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti: čistoća vode nalazi se ispod svakog odvajanja, a kada se ona promijeni, s njom se mijenja i metoda.
Čistoća vode utječe na kvalitetu HPLC podataka na četiri praktična načina: osnovna stabilnost, oblik vrha, reproducibilnost zadržavanja i vijek trajanja instrumenta. Uključeni kontaminanti mogu biti organske molekule, otopljeni ioni, čestice ili mikrobi. Čak i mala količina jedne vrste nečistoće može proizvesti posljedice nerazmjerne njihovoj koncentraciji.
Glavni učinci čistoće vode na HPLC
U HPLC sustavu voda je reagens, a ne pasivna podloga. Nosi pufer, otapa uzorak i pridonosi pozadini detektora. Nečistoće u vodi stoga ulaze izravno u analitički signal. Donja tablica sažima najčešće zagađivače i njihove učinke.
| Zagađivač | Primjeri ili Izvor | Učinak u HPLC |
|---|---|---|
| Otopljene organske tvari | Huminske tvari, plastifikatori, ostaci čišćenja, pare otapala | Dvostruki vrhovi koji apsorbiraju UV zrake, pomicanje osnovne linije, promjene zadržavanja |
| Anorganski ioni | Natrij, klorid, silikat, metali u tragovima | Promjene vodljivosti, smetnje u ionskoj kromatografiji i LC-MS, širenje vrha povezano s metalima |
| Čestice | Fine smole, prašina, talog | Blokirani friti, rastući protutlak, istrošenost brtve pumpe, bučna osnovna linija |
| Otopljeni plinovi | Kisik, ugljikov dioksid, dušik | Mjehurići u detektoru, bazni skokovi, pH pomak |
| Mikroorganizmi | Bakterije i biofilmovi u spremnicima za skladištenje | Zaprljanje kolone, začepljene friteze, lažni vrhovi, nestabilnost metode |
Ovi učinci nisu samo teoretski. Mikrobni biofilm u rezervoaru vode može otpustiti metabolite koji apsorbiraju UV zračenje, a kada se taj film formira, jednostavnom zamjenom vode možda nećete riješiti problem dok se rezervoar ne očisti i dezinficira.
Što "HPLC-razred" i voda tipa 1 zapravo znače
Većina analitičkih metoda zahtijeva vodu koja zadovoljava specifikacije tipa 1. U praktičnom smislu, to znači da je otpornost na 25 stupnjeva Celzijusa oko 18,2 megohm-centimetra, vodljivost blizu 0,055 mikrosiemena po centimetru, a ukupni organski ugljik je dovoljno nizak da voda ne stvara vidljivu UV ili MS pozadinu. Sama otpornost nije dovoljna. Također morate znati razinu TOC-a, broj čestica i, u nekim primjenama, vrijednosti silikata ili natrija.
pH pročišćene vode nije korisna specifikacija. Ultra čista voda nema gotovo nikakav kapacitet puferiranja i brzo apsorbira ugljični dioksid iz zraka, tako da izmjereni pH oko 5,6 jednostavno odražava otopljeni CO2. Važan pH je pH puferirane mobilne faze koju pripremate.
Zahtjevi za kvalitetu vode također ovise o detektoru. UV detekcija na 210 nm posebno je osjetljiva na organsku kontaminaciju jer tamo apsorbiraju mnoge veze ugljik-kisik i ugljik-dušik. LC-MS treba vodu s vrlo malo nehlapljivih nečistoća kako bi se izbjegla supresija iona i stvaranje adukta. Nehlapljiva kontaminacija na sličan način utječe na detektore isparavanja jer povećava pozadinski signal. Voda tipa 1 stoga je dobro polazište za gotovo svaku HPLC primjenu.
Flaširana voda HPLC kvalitete može funkcionirati, ali mora se pravilno skladištiti i rukovati njome. Provjerite potvrdu o analizi, zabilježite broj serije i nikada ne pretpostavljajte da u starom spremniku nema biološkog rasta.
Gradijentno ispiranje čini nečistoće vode vidljivima
Nečistoće vode su najvidljivije kod gradijentnih metoda. U izokratskom radu, kontaminant koji apsorbira UV zrake može jednostavno malo povisiti osnovnu liniju. U gradijentu, udio vode počinje visoko, a udio organskog otapala raste tijekom vremena. Kontaminanti se mogu zadržati na čelu kolone, a zatim eluirati kako organski sadržaj raste. To proizvodi duhovite vrhove i pomičnu osnovnu liniju koja može ometati integraciju i kvantitaciju.
Zato je prazni gradijent jedna od najjednostavnijih provjera kvalitete vode. Izvedite svoj točan gradijent bez ubrizgavanja uzorka. Ako se vršne vrijednosti pojave u slijepoj probi, mobilna faza je sumnjiva.
Dnevne navike koje štite čistoću vode
Čista voda ne ostaje čista slučajno. Sljedeće navike sprječavaju najčešće probleme u HPLC praksi.
- Koristite vodu iz sustava za pročišćavanje sa svježim ulošcima, radnom UV lampom i redovitom dezinfekcijom.
- Skupite vodu u čistu, zatvorenu posudu. Nemojte ostavljati spremnik otvoren dok sustav radi.
- Nemojte čuvati vodu danima. Pripremite mobilnu fazu sa svježom vodom isti dan kad god je to moguće.
- Izbjegavajte dodavanje svježe vode u djelomično ispunjen spremnik. Zamijenite sadržaj spremnika umjesto da ga dopunite.
- Izvedite prazan gradijent na valnoj duljini korištenoj za analizu i zabilježite rezultat.
- Dokumentirajte otpornost, TOC i datum prikupljanja vode u svojim analitičkim zapisima.
Za laboratorije koji koriste vodu u bocama vrijede ista pravila. Provjerite rok trajanja, zatvorite spremnik odmah nakon upotrebe i nemojte vraćati neiskorištenu vodu iz čaše u bocu.
Aditivi pretvaraju problem vode u problem metode
Mobilne faze rijetko sadrže samo vodu. Puferske soli, kiseline, reagensi ionskih parova i neki specijalizirani modifikatori dodaju se u relativno niskim koncentracijama. Ako voda sadrži tragove nečistoća koje apsorbiraju UV zračenje, te nečistoće možda neće promijeniti kapacitet pufera, ali se i dalje mogu pojaviti u signalu detektora.
Ionske tekućine ponekad se koriste kao modifikatori mobilne faze za poboljšanje oblika vrha ili selektivnosti. Kada odaberete jedan, treba se primijeniti isti standard čistoće. na primjer, l-etil-3-metilimidazolij tetrafluoroborat je uobičajena ionska tekućina za kromatografska istraživanja. Treba ga otopiti u vodi koja već zadovoljava specifikacije tipa 1; inače, aditiv postaje još jedan izvor kontaminacije. Ako želite razumjeti svojstva ovih spojeva povezana s odvajanjem, naš pregled rada ionskih tekućina u procesima odvajanja pokriva praktične varijable.
CAS:143314-16-3 -1 -Ethyl-3-methylimidazolium Tetrafluoroborate Liquids Dobavljač Ldet tehnologija je prilagođena Kini CAS:143314-16-3 -1 -Ethyl-3-methylimidazolium Tetrafluoroborate Liquids dobavljači i 1 -Ethyl-3-methylim... Pogledajte proizvod → Čistoća počinje s dobavljačem
U Zhejiang Ldetu proizvodimo ionske tekućine i specijalne kemikalije. Znamo iz proizvodnje da tragovi nečistoće u početnom materijalu mogu promijeniti performanse nizvodno. Zato provjeravamo sadržaj vode, zaostale halogenide i UV ponašanje prije puštanja u promet. Ista disciplina pripada HPLC laboratoriju: odaberite materijale koji dolaze s dokumentiranim specifikacijama. na primjer, l-butil-3-metilimidazolij tetrafluoroborat dostupan je s podacima o čistoći koji vam omogućuju procjenu je li kompatibilan s vašom metodom detekcije.
CAS: 174501-65-6-1-Butil-3-metilimidazolij tetrafluoroborat Dobavljači tekućina Ldet Technology je CAS prilagođen Kini: 174501-65-6-1-Butil-3-metilimidazolij tetrafluoroborat Dobavljači tekućina i 1-Butil-3-metilimid... Pogledajte proizvod → Što provjeriti na potvrdi o analizi
- Preostali sadržaj halogenida, jer halidi mogu utjecati na odvajanje ionskom izmjenom i koroziju.
- Sadržaj vode, jer voda mijenja efektivnu koncentraciju aditiva.
- UV spektar ili UV granica, tako da možete predvidjeti pozadinsku apsorbanciju.
- Dosljednost lot-to-lot, jer novi lot ne bi trebao tiho promijeniti vašu metodu.
Ako trebate pomoć pri povezivanju materijala s metodom, možete razgovarajte o podacima o čistoći i prilagođenim zahtjevima s našim tehničkim timom .
Tretirajte vodu kao dio metode
Čistoća vode u HPLC-u nije jednokratna postavka. To je dnevna varijabla koja se može mijenjati s godišnjim dobom, bocom za skladištenje i stanjem sustava za pročišćavanje. Koristite vodu tipa 1, potvrdite TOC i otpornost, pravilno rukujte njome i odaberite aditive sa sljedivošću. U metodi koja se temelji na nanogramima analita, voda nikada nije "samo voda".
